GPComplex甘草多糖抗非小細(xì)胞肺癌藥效學(xué)研究

2023-04-10

GPComplex 甘草多糖抗非小細(xì)胞肺癌藥效學(xué)研究總結(jié)報告

一、試驗目的

觀察灌胃給予GPComplex甘草多糖對人源肺癌H460細(xì)胞小鼠體內(nèi)移植模型的作用，對環(huán)磷酰胺所致小鼠免疫功能低下的調(diào)節(jié)作用，從抑制腫瘤生長、提高免疫方面初步評價GPComplex甘草多糖的抗腫瘤作用，探索劑量反應(yīng)關(guān)系、程度等，并大致判斷其是否具有毒性、程度及劑量反應(yīng)關(guān)系，為甘草多糖后續(xù)開發(fā)提供藥效學(xué)依據(jù)。

二、腫瘤細(xì)胞株

人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞H460，購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院

三、劑量設(shè)置、組別設(shè)置、給藥途徑及選擇依據(jù)

甘草多糖：根據(jù)合同規(guī)定，甘草多糖的小鼠給藥劑量設(shè)置低、中、高三個劑量，分別為0.25 g·kg^-1、0.5 g·kg^-1、1 g·kg^-1。

紫龍金：臨床日用量為0.65 g/片×4片/次×3次/天=7.8 g，人按60 kg計，小鼠按20 g計，按體表面積換算小鼠的臨床等效劑量為1.5 g·kg^-1。將紫龍金劑量設(shè)置為3 g·kg^-1，為臨床等效劑量的兩倍。

索拉菲尼：臨床日用量為0.2 g/片×2片/次×2次/天=0.8 g，人按60 kg計，小鼠按20 g計，按體表面積換算小鼠的臨床等效劑量為0.15 g·kg^-1。并根據(jù)前期該藥的試驗結(jié)果，將索拉菲尼劑量設(shè)置為50 mg·kg^-1，為臨床等效劑量的三分之一。

抗腫瘤試驗：共設(shè)計6組，分別為對照組、紫龍金組、索拉菲尼組、甘草多糖低、中、高劑量組，每組7只。

調(diào)節(jié)免疫功能試驗：共設(shè)計6組為，分別對照組、模型組、紫龍金組、甘草多糖低、中、高劑量組，每組10只。

甘草多糖擬臨床用藥途徑為口服給藥，因此選擇灌胃給藥；紫龍金及索拉菲尼均采用相似于臨床用藥途徑的灌胃給藥方式。

四、試驗方法

采用人肺癌H460細(xì)胞小鼠皮下移植模型，觀察GPComplex甘草多糖對腫瘤生長的抑制作用。選用Balb/c-nu雌性小鼠，接種H460腫瘤組織塊，待小鼠體內(nèi)接種的腫瘤生長至100mm³左右時，依腫瘤體積分為對照組、甘草多糖高劑量（1 g·kg^-1）組、中劑量（0.5 g·kg^-1）組、低劑量（0.25 g·kg^-1）組、紫龍金（3 g·kg^-1）組、索拉菲尼（50mg·kg^-1）組，每組7只。分組后隨即每天灌胃給藥1次，對照組給予去離子水，共持續(xù)32天，于末次給藥后次日取血后脫頸處死取腫瘤稱重。試驗期內(nèi)每周2次測量腫瘤體積及動物體重。
選用ICR雄性小鼠，隨機(jī)分為對照組，模型組，紫龍金（3 g·kg^-1）組、甘草多糖高劑量（1 g·kg^-1）組、中劑量（0.5 g·kg^-1）組、低劑量（0.25 g·kg^-1）組，每組10只。分組后即開始每天灌胃給藥1次，對照及模型組給予去離子水，共給藥14天。給藥第6、7天時，除對照組外，其余各組小鼠均腹腔注射環(huán)磷酰胺80mg·kg^-1，第15天眼眶靜脈叢取血，EDTA抗凝，用于淋巴細(xì)胞亞群分析：CD3+（T細(xì)胞）、CD3+CD4+（輔助性T細(xì)胞和遲發(fā)超敏性T細(xì)胞）、CD3+CD8+（抑制性T細(xì)胞和殺傷性T細(xì)胞）、CD3-CD19+（B細(xì)胞）、CD3-CD335+（NK細(xì)胞），統(tǒng)計各陽性細(xì)胞占淋巴細(xì)胞的百分比，并計算CD4/CD8的比值。

五、試驗結(jié)果及結(jié)論

1. 人肺癌H460細(xì)胞小鼠皮下移植模型試驗結(jié)果顯示，與對照組比較，GPComplex甘草多糖1 g·kg^-1給藥32天可使抑瘤率超過30%，達(dá)30.5%，且對小鼠體重?zé)o明顯影響，提示GPComplex甘草多糖具有抑制人源肺癌H460小鼠體內(nèi)生長的趨勢，且無明顯毒副作用。

圖1甘草多糖對腫瘤H460體內(nèi)增殖模型的影響

2. 環(huán)磷酰胺致小鼠免疫功能低下模型試驗結(jié)果顯示，與正常小鼠比較，模型組小鼠給予環(huán)磷酰胺后，CD3、CD4、CD8、CD19陽性細(xì)胞比例明顯下降，CD335陽性細(xì)胞比例明顯升高。與模型組比較，甘草多糖1 g·kg^-1給藥14天明顯升高CD3、CD4陽性細(xì)胞比例，降低CD335陽性細(xì)胞比例，逆轉(zhuǎn)環(huán)磷酰胺的不利影響。提示GPComplex甘草多糖1 g·kg^-1灌胃給藥14天，具有明顯促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖，提高機(jī)體免疫功能的作用。